Selecția policlonală a mutațiilor checkpoint-urilor imune în autoimunitatea tiroidiană
Conform nature.com, sistemul nostru imunitar conține multiple checkpoint-uri pentru a preveni activarea limfocitelor auto-reactive. Însă, modul în care unele limfocite scapă acestor constrângeri și provoacă boli autoimune rămâne în mare parte neînțeles.
👉 Ipoteza mutațiilor somatice în limfocitele auto-reactive
O ipoteză veche sugerează că mutațiile somatice în genele implicate în reglarea imunității ar putea permite limfocitelor auto-reactive să ocolească checkpoint-urile de toleranță. Testarea acestei ipoteze a fost dificilă din cauza limitărilor tehnice. În acest studiu, folosim secuențierea completă a exomului și NanoSeq, un protocol precis de secuționare a ADN-ului unic, pentru a căuta în mod cuprinzător mutații de conducere în boala tiroidiană autoimună.
Am descoperit multe clone de celule B care au dobândit convergent mutații de tip pierdere a funcției în genele cheie pentru checkpoint-urile imune, TNFRSF14 (HVEM) și CD274 (PD-L1), precum și mutații mai puțin frecvente în alte gene imune. În biopsiile extrem de inflamate, am detectat zeci până la sute de clone mutant independente ale checkpoint-urilor imune. Tehnici precum microdisecția cu laser, secvențierea metilației, transcriptomica spațială, imunostaining-ul, secvențierea ADN-ului din nucleul unic și sinteza de anticorpi au localizat aceste mutații la celulele B, confirmând că unele sunt auto-reactive și identificând clone ce poartă multiple mutații.
👉 Concentrația și impactul mutațiilor somatice în celulele B autoimune
Am observat pierderi bialle ale genei TNFRSF14 răspândite și clone cu până la 4-6 mutații de conducere. Deși fiecare clonă reprezintă o mică fracțiune a celulelor (de obicei <1%), numeroasele clone mutant în fiecare donator constituie o fracțiune semnificativă a celulelor B ce poartă mutații de conducere. Rezultatele noastre susțin ipoteza că mutațiile somatice în limfocitele autoimune pot permite acestora să scape de constrângerile de toleranță printr-o cascadă policlonală de evoluție somatică, oferind noi perspective asupra bazei moleculare a bolilor autoimune.